Ya casi finalizando el semestre se ha podido realizar bastante de acuerdo a lo planeado. Lo mas importante, lo cual era crear un stock numeroso de “Lippia Dulcis” puertorriqueña, va en buen camino. Por otro lado no se ha podido clonar la planta mexicana sin contaminacion. Se ha tratado de rediseñar la manera en que le limpian las plantas e instrumentos, pero siempre se encuentra la contaminacion. Por esto puedo decir que en una escala del 1-5 tenemos un 4 de progreso para la investigacion.

Abtract

The term phytoremediation comes from the use of plants to clean air, water and soils. Plants considered hyper-accumulators can remove large quantities of substances considered contaminants of xenobiotic origin. Lippia dulcis is an autochthonous medicinal plant also used as a natural sweetener by the Mayas. The objective of this research is to study the accumulating characteristics of this plant using available clones grown in vitro. The contaminant of interest is mainly trinitrotoluene (TNT), a common pollutant left on sites where explosives have been used, stored or manufactured.

The Lippia dulcis from Puerto Rico was successfully placed in vitro after several trials under appropriate aseptic techniques. Clones of the mother plant were exposed to increasing amounts of TNT. Plantlets were placed in liquid media doped with TNT (0.0, 5.0 and 75 ppm). Initial results showed that the L. dulcis plantlets continued to grow in the presence of the contaminant. The TNT concentration in the media was measured by HPLC analysis and was found that after several weeks the TNT concentration had decreased considerably. This suggests that L. dulcis may be a viable plant for use as a phytoremediator on soils contaminated with TNT. Future experiments are planned to confirm these preliminary results as well as explore in detail the fate of the contaminant.

Keywords: TNT, Phytoremediation, Contaminated Soils, Lippia Dulcis

En este nuevo semestre se espera cumplir con varias tareas como parte de la investigacion. Se espera si es posible confirmar los resultados obtenidos anteriormente para la “Lippia Dulcis”. A finales del semestre pasado se pudo realizar un experimento y comprobar la capacidad fitorremediadora de la planta en un experimento preliminar. En este semestre tambien se busca el crear un stock de mas cantidad de plantas para que sobrevivan en los meses de verano ya que no habra nadie trabajando en el laboratorio. Tambien esperamos poder finalmente clonar de una manera efectiva la “Lippia Dulcis” mexicana. Esperamos poder desarrollar nuevas tecnicas de limpieza las cuales permitan el crecimiento de esta planta sin contaminacion alguna. Queremos hacer esto ya que la planta mexicana y la de Puerto Rico poseen caracteristicas muy distintas las cuales podrian afectar y manipular su capacidad fitorremediadora. De lograr un stock de la planta mexicana se realizarian experimentos preliminares para comparar los resultados con los obtenidos para la planta crecida en Puerto Rico.

Hola de nuevo a todos y en realidad pido mil disculpas ya que me han pasado tantas cosas de las cuales no poseo ningun control en este semestre que no pude escribir en el blog.

Es muy cierto lo que dicen acerca de como las cosas no siempre salen como uno espera. Lo cierto es que no siempre es algo negativo. Desde que comenze el proyecto en el laboratorio con la Lippia se trabajo para observar cuanto cadmio esta podia absorber. Inclusive el pasado semestre se pudo observar que la Lippia sobrevivia al cadmio, pero por razones ajenas a nuestro alcance no se pudo medir cuanto cadmio fue absorbido. Sin embargo este semestre se subcultivo la Lippia en medio con TNT. Los resultados fueron increibles. Esperamos poder terminar varios experimentos con TNT este mismo semestre. El proximo semestre terminaremos experimentos con TNT y continuaremos con cadmio. Tal vez podamos experimentar con otros metales pesados por igual.

     Luego de tantos intentos fallidos en el semestre, la Lippia a comenzado a rendir frutos nuevamente. Para esto hemos tenido que casi rediseñar las tecnicas asepticas que utilizamos. Todo es lavado antes de utilizarse con un poco de “cloro” y esterelizado en el autoclave. Luego utilizamos redesillas y mascaras para disminuir la contaminacion. Esto nos ha permitido que como previsto al comienzo del semestre esperamos tener suficiente Lippia como para tener “stock” y correr varios experimentos antes de finalizar este semestre. Es cierto que estamos un poco mas atras de lo previsto, pero en estas ultimas semanas la Lippia a dado un giro increible de nada que queria crecer a un 90% de los nodos creciendo exitosamente. Es muy temprano para decir pero estas Lippias parecen seran las primeras en pasar por las experimentaciones en los medios contaminados.

     Ademas de la Lippia Dulcis hemos tratado de trabajar con la llamada Lippia amarga o azteca. Este tipo de Lippia no ha sido posible hasta el momento de crecer en el laboratorio exitosamente. En estos precisos momentos se esperan resultados de un subcultivo hecho hace varios dias de este tipo de Lippia. Si este subcultivo resulta exitoso es posible tener suficiente Lippia de ambos tipos para correr experimentos entre este y el proximo semestre. En estos momentos al parecer hemos logrado alrededor de un 60% – 80 % de los objetivos, todo dependiendo de los resultados de los ultimos sublcultivos.

No todas las cosas salen a la primera, y no porque algo haya salido bien de una manera siempre sera asi. Precisamente es el caso con la Lippia. En el primer semestre en el laboratorio aprendimos las tecnica asepticas correctas. Luego aprendimos como las tecnicas de subcultivo de cada planta, tecnicas que seran muy importantes para el resto de la investigacion. Todo ocurrio relativamente rapido y se pudo crear un stock de Lippia, e incluso utilizar algunas para experimentos preliminares. Luego comenzo el segundo semetre con entusiasmo por lo que estaba en agenda para la Lippia. Fue entonces cuando la Lippia se nego a crecer. Solo el subcultivo hecho a princpio del semestre crecio como esperado. Luego hemos tratado de traer al laboratorio dos veces Lippia dulcis proveniente de Mexico, conocida como Lippia amarga. Ambos intentos han fallado pues en solo dos o tres dias se observa que todos los nodos estan contaminados. Luego de estos intentos llego el momento de subcultivar la Lippia creciendo en la camara, ya que llego al tamaño maximo para su “envase”. Parte de estos nodos, los cuales no deberian mostrar nada de contaminacion muestran lo contrario. Este periodo de crecimiento sera muy importante para la Lippia. Estos casos de contaminacion nos han obligado a lavar absolutamente todo en el laboratorio, inclusive los autoclaves, para reducir las probabilidades de contaminacion lo mas posible. Estos intentos fallidos han atrasado parte de las metas propuestas para este semestre, no solo para mi, sino para otros compañeros, pero a mal tiempo buena cara. Siempre mirando hacia adelante, recordando que no hay cosa que valga la pena que sea muy facil.

     Luego de la tempestad llega la calma, y luego de las vacaciones llega el trabajo. Durante las vacaciones aunque pensaba dar un poco de seguimiento a mi querida Lippia no pude debido a mis clases de verano. De todos modos compañeros del laboratorio pudieron dar el seguimiento requerido durante junio y julio. Para el comienzo de clases colegas del laboratorio, Lianette Rivera y Sorivette Surillo, subcultivaron las Lippias existentes ya que por problemas ajenos a mi no pude asistir al laboratorio el primer dia.  Gracias Sory y Lilo ☺☺!!!
     Durante el pasado semestre todos en el laboratorio desarrollamos las técnicas asépticas necesarias en el laboratorio y perfeccionamos las técnicas de subcultivación ademas de encontrar el mejor medio para crecer casi todas las plantas con las cuales estamos trabajando. Aunque se realizo un pequeño experimento para la Lippia con el cadmio a finales del semestre no fui yo el que trabajo con el HPLC y las diferentes curvas de calibración.
     Para este mes todos en el laboratorio esperamos poder seguir manteniendo el “stock” existente de cada planta para los experimentos por venir y poder comenzar a trabajar directamente con la fitorremediación, o sea poder subcultivar las plantas con el medio contaminado con el metal a estudiar. Es por esta razón que aprenderemos y perfeccionaremos las técnicas necesarias para utilizar el HPLC, el disecador,  y nos familiarizaremos con las columnas de cromatografía y calibración entre otras cosas. Más que nada esperamos que este semestre sea uno muy productivo y de mucho aprendizaje ya que esperamos poder realizar los experimentos necesarios para encontrar si las plantas que estudiamos son o no viables para utilizar para la fitorremediación.

Hola a todos nuevamente. La universidad me tiene tan ajetreado que ni la computadora puedo utilizar. pero nada. Mi investigacion va super bien. He podido clonar mi planta, lippia dulcis, super bn y sin muchas complicaciones. De una sola planta pude cultivar alrededor de 50 nodos los cuales 20 han sobrvivido hasta la etapa final en la cual es la de crecer raices. Ahora que tienen raices se pasaran a un medio contaminado con cadmio. Todavia no sabemos que concentracion de cadmio utilizaremos pero estamos entre 50 o 100 ppm. El martes 29 de abril se hara una curva de calibracion para el cadmio en el laboratorio para luego poder determinar cuando cadmio la planta ha podido absorber. En realidad que estoy muy contento y espero ansiosamente los resultados finales de este experimento que lamentablemente junto con otra compañera que trabaja con TNT sera el unico que se podra realizar este semestre. Tan pronto mi experimento avance un poco mas les dejare saber.

Hola nuevamente! Se que ha pasado bastante tiempo desde la primera vez que escribi y me disculpo (nuevamente).
Como les explique anteriormente mi investigacion es acerca de la fitoremediacion con la Prefesora Lolita Rodriguez. La experiencia ha sido una excelente. Gente nueva que he conocido y detrezas que he adquirido. En cuanto a la investigacion aunque a veces un poco trabajosa, me gusta mucho y va hacia adelante a paso seguro. Yo personalmente estare trabajando junto a una compañera con la planta de Lippia, aunque todos ayudamos con todas las plantas.
Mi primer experimento para crecer Lippia fracaso totalmente ya que por lo visto deje las plantas mucho tiempo en el cloro al limpiarlas y este las seco. Esto ocasiono un leve cambio para limpiar las plantas de Lippia ya que necesitan menos alcohol que las demas. Todavia tenemos un poco de problemas en cuanto al hongo. Aunque nuestros clones estan creciendo a varios les ha crecido hongo lo cual descarta de inmediato a dicha muestra. Tan pronto pueda estare añadiendo a mi blog fotos de las plantas.  Esperamos tener suficientes clones para final del semestre para poder realizar varios experimentos con los diferentes metales que estudiamos.

Hola mi nombre es Rafael y soy de RUM. Disculpen mi tardanza para mi primer “entry” a mi blog. Como parte del programa de Bio-Minds mi investigación es acerca la fitoremediación. Me imagino que muchos no sabran que rayos es eso de la fitoremediación. Para mi es una palabra que quiere decir “usar las plantas para limpiar” pero esa es mi definición personal.
En el laboratorio utilizaremos distintas plantas para realizar los experimentos. Se crean “clones” de estas plantas, siendo la técnica mas común sembrar los nodos ( parte en donde comienzan a crecer las hojas del tallo) sin las hojas y con una parte del tallo. Estos nodos se colocan en un medio solido o líquido creado en el laboratorio para ofrecerle a la planta nutrientes necesarios para crecer. Luego se repite el proceso con los clones creados para multiplicar la cantidad de plantas.
Luego comienza la verdadera fitoremediación. Se colocan las plantas en medios con diferentes metales. Los que utilizamos en el laboratorio para los experimentos son cadmio, calcio y TNT, y se observa como se afecta la planta y los alrededores como el pH.
Nuestros descubrimientos pueden ser utilizados en un futuro para usar las plantas para descontaminar terrenos conteniendo metales.